本技術(shù)涉及抗gucy2c抗體和對應(yīng)的包含鵝膏毒素的抗體-藥物綴合物。在另一方面，本發(fā)明涉及用于在治療諸如結(jié)直腸癌(crc)或轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌(mcrc)的胃腸癌中使用的包含此類綴合物的藥物組合物。

背景技術(shù)：

1、胃腸癌占所有癌癥確診病例的大約26％，并且導(dǎo)致全球大約35％的癌癥死亡。在2018年，全球估計(jì)有480萬新的胃腸(gi)癌病例和340萬相關(guān)死亡。

2、胃腸癌包括食管癌、胃癌、結(jié)直腸癌、肝癌、食管癌和胰腺癌，其中結(jié)直腸癌(crc)是最常見的，并且占所有新病例的約10.2％，其次是胃癌(5.7％)、肝癌(4.7％)、食管癌(3.2％)和胰腺癌(2.5％)。crc占所有癌癥相關(guān)死亡的約9％，其次是胃癌(8.2％)、肝癌(8.2％)、食管癌(5.3％)和胰腺癌(4.5％)，其中2018年全球約有340萬例gi癌死亡(arnold等人(2020)gastroenterology?159:335-349)。因此，結(jié)直腸癌(crc)是世界上僅次于肺癌和乳腺癌的第三大常見癌癥，但其是癌癥死亡的第二大原因。

3、在女性中，crc是第二大常見的成人癌癥，而在男性中是第三大常見的癌癥，并且它是癌癥死亡的第四大原因。

4、5年和10年存活率分別為65％和58％，并且男性的發(fā)病率和死亡率比女性高25％。從1975年到2013年，年齡在20-49歲之間的美國人中，crc發(fā)病率從每100,000人10例增加至15例。與此同時，在諸如阿根廷、巴西和中國等發(fā)展中國家中，crc病例增加了約20％。此外，所有患crc的患者中的30％經(jīng)歷轉(zhuǎn)移，其預(yù)后仍然很差，美國的中位5年存活率僅為18.5％并且歐洲為27.7％。

5、盡管事實(shí)是由于篩查和治療范式的改進(jìn)，發(fā)病率在過去30年中有所下降，但令人震驚的是，在2012-2016年間，小于50歲的個體的發(fā)病率一直在穩(wěn)步增加，并且年度總發(fā)病率上升了2.2％。這種范式轉(zhuǎn)變的確切病因尚不清楚，但是，這可能歸因于飲食和其他生活方式風(fēng)險(xiǎn)因素的變化，或者可歸因于年輕人非系統(tǒng)篩查的增加。

6、所有患crc的患者中的10％-20％具有陽性家族史，并且所有crc病例中的約5％與可通過種系檢測出的已知遺傳性crc綜合征有關(guān)。在一些情況下，散發(fā)性crc發(fā)病率增加與長期炎性腸病和多變的生活方式因素(諸如缺乏身體活動、不健康的飲食、吸煙、肥胖癥和大量飲酒)有關(guān)。

7、crc治療的臨床結(jié)局和藥物反應(yīng)性的差異取決于癌癥沿結(jié)腸和直腸的位置。相關(guān)的促成因素包括它們獨(dú)特的生理功能、腸道微生物組、區(qū)域性常駐免疫細(xì)胞類型、飲食致癌物、疾病檢測的時機(jī)。另外，個體發(fā)育因素可影響疾病嚴(yán)重程度和治療結(jié)局：

8、近端(右)大腸(盲腸、升結(jié)腸和橫結(jié)腸)源自胚胎中腸，而遠(yuǎn)端(左)大腸(脾曲、降結(jié)腸、乙狀結(jié)腸和直腸)源自胚胎后腸。這些個體發(fā)育差異與沿近端-遠(yuǎn)端軸的差異基因表達(dá)模式相關(guān)。在女性和非裔美國人中，近端散發(fā)性結(jié)腸腫瘤更常被確診，在病例中發(fā)病率占比51％-62％，在首次診斷時還顯示較高的tnm分期，顯示出高水平全基因組啟動子高甲基化模式即cpg島甲基化表型(cimp)，由于dna錯配修復(fù)機(jī)制缺陷(dmmr)而展現(xiàn)出微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(msi)，在kras和braf中更頻繁突變并且在存活方面具有更差的預(yù)后。遠(yuǎn)端結(jié)直腸腫瘤更有可能表現(xiàn)為染色體不穩(wěn)定(cin)，并且顯示出更有利的預(yù)后。

9、crc的基因組譜分析揭示了由疾病起始和進(jìn)展期間基因突變和染色體畸變的積累導(dǎo)致的顯著的腫瘤內(nèi)和腫瘤間異質(zhì)性。crc中的基因組不穩(wěn)定性表現(xiàn)為兩種主要形式(cin和msi)之一。缺乏cin或msi的crc被分類為基因組穩(wěn)定(gs)crc。

10、在gs?crc中，dna修復(fù)基因和腫瘤抑制因子可能通過cimp發(fā)生轉(zhuǎn)錄沉默，但是大比例的msi?crc和小群體的cin?crc也是cimp陽性的，并且約10％的crc對cin、msi或cimp呈陰性。

11、染色體不穩(wěn)定(cin)cin的特征在于染色體數(shù)量改變(非整倍性)和結(jié)構(gòu)改變(體細(xì)胞拷貝數(shù)改變、缺失、插入、擴(kuò)增或雜合性丟失)，發(fā)生在65％-70％的散發(fā)性crc中。幾乎所有的cin腫瘤都顯示激活的wnt信號傳導(dǎo)，并且80％具有apc(wnt途徑的負(fù)調(diào)節(jié)因子)的突變失活。tp53的突變失活/缺失發(fā)生在60％的cin腫瘤中，并且p53功能喪失直接驅(qū)動cin并且為基因組不穩(wěn)定機(jī)制提供了容許背景。

12、關(guān)于基因組不穩(wěn)定，端粒功能障礙和p53缺乏的組合是主要的cin機(jī)制，如通過人crc早期癌中后期橋的發(fā)生和端粒酶缺乏的p53突變小鼠中自發(fā)性crc的發(fā)生所揭示的。

13、微衛(wèi)星不穩(wěn)定(msi)crc的特征在于存在微衛(wèi)星(即含有傾向于積累比其他基因組區(qū)域更高突變率的重復(fù)基序的dna序列)。msi是由mmr基因(包括mlh1、msh2、msh3、msh6、pms2和exo1)突變失活引起的dmmr的表型表現(xiàn)(de'angelis等人acta?biomed2018年12月17日；89(9-s):97-101)。

14、有助于crc病因?qū)W的其他重要因素是激活促進(jìn)crc癌細(xì)胞的促增殖狀態(tài)的關(guān)鍵信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的體細(xì)胞基因改變。在crc中，主要的促增殖信號傳導(dǎo)通路是egfr-ras和wnt-β-連環(huán)蛋白通路。

15、egfr信號傳導(dǎo)egfr激活觸發(fā)下游ras/raf/mek/erk和pi3k/akt信號傳導(dǎo)級聯(lián)(其最終導(dǎo)致增殖)。在crc中，egfr本身的突變很少見，其中1％的crc病例可歸因于突變(barber等人n?engl?j?med?351:2883)，相反在約80％的crc中顯示過表達(dá)。增強(qiáng)的egfr激活可以經(jīng)由翻譯后修飾發(fā)生，所述翻譯后修飾涉及蛋白精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶1(prmt1)對r198和r200的甲基化，這增強(qiáng)了egfr與egf的結(jié)合和隨后的信號傳導(dǎo)激活，甚至在egfr抑制劑存在的情況下也是如此。

16、最近已經(jīng)證明，肝細(xì)胞生長因子(hgf)(即met-受體的配體)可以在單個lgr5+小鼠腸干細(xì)胞(isc)向腸類器官(包括所有分化的腸細(xì)胞譜系)的生長中完全替代egf。此外，hgf和egf在促進(jìn)apc-突變小鼠類器官擴(kuò)增方面同樣有效，而體內(nèi)isc中的met缺失減弱了干細(xì)胞的適應(yīng)性并減弱apc-驅(qū)動的腸腺瘤的形成。這些發(fā)現(xiàn)表明egfr和met信號傳導(dǎo)在小鼠腸粘膜中具有重疊和部分冗余的功能。最近的結(jié)果還表明，在人isc和crc干細(xì)胞中，hgf/met信號傳導(dǎo)可以完全克服egfr抑制，甚至在存在egfr抑制的情況下，允許單個正常isc以及apc突變細(xì)胞擴(kuò)增為類器官(joosten等人gastroenterology?2019年10月；157(4):1153-1155)。

17、對egfr阻斷的臨床有效性具有決定性的另一個因素是其下游信號傳導(dǎo)組分的突變狀態(tài)，具體地，ras、raf、mek或erk中的功能獲得性突變，所述突變可以在egfr抑制后維持癌細(xì)胞增殖和存活。kras、nras或hras中的激活突變共同存在于約50％的crc病例中；這些突變涉及密碼子12或13，并且不太頻繁地涉及密碼子61、117或146。關(guān)于crc中的ras途徑，在熱點(diǎn)密碼子600(v600e)中，ras效應(yīng)子(braf)在10％-15％的早期crc中是突變的，并且在大約5％的iv期crc中是突變的。臨床上，由于egfr介導(dǎo)的對mapk信號傳導(dǎo)的再激活，單獨(dú)抑制braf在轉(zhuǎn)移性brafv600e?crc中顯示出有限的活性，導(dǎo)致批準(zhǔn)egfr抑制劑與braf和mek抑制劑的組合，所述組合現(xiàn)在已成為患有轉(zhuǎn)移性braf突變腫瘤的患者的標(biāo)準(zhǔn)護(hù)理。

18、crc的篩查可以經(jīng)由以下方式完成：直接可視化方法(諸如結(jié)腸鏡檢查、ct結(jié)腸成像、柔性乙狀結(jié)腸鏡檢查(flexible?sigmoidoscopy)、柔性乙狀結(jié)腸鏡檢查聯(lián)合糞便免疫化學(xué)測試(fit))，或基于糞便的測試(諸如基于愈創(chuàng)木脂的糞便潛血測試、fit或多靶向糞便dna測試)，或血清學(xué)測試(諸如sept9?dna測試)。

19、一旦做出crc的診斷，分期是重要因素，因?yàn)樗鼪Q定了患者的治療選擇。對于腫瘤分期，由美國癌癥聯(lián)合委員會(ajcc)/國際癌癥控制聯(lián)盟(uicc)共同制定的腫瘤、淋巴結(jié)、轉(zhuǎn)移(tnm)系統(tǒng)是一種常用的分期系統(tǒng)，其定義了以下癌癥分期：crc的標(biāo)準(zhǔn)常規(guī)治療是手術(shù)、化療和放射療法。根據(jù)疾病的定位和進(jìn)展，這些治療可以組合使用。治療選擇包括例如對于i期，單獨(dú)手術(shù)切除。對于iii期，標(biāo)準(zhǔn)護(hù)理為治愈手術(shù)后進(jìn)行輔助化療。通過腹腔鏡和經(jīng)肛門手術(shù)方法的全直腸系膜切除(tme)通常是對于局限性癌癥并且腫瘤位置容易觸及的情況下的選擇。然而，完全去除所有癌細(xì)胞通常是不可能的。約66％的ii期和61％的iii期結(jié)腸和直腸患者必須經(jīng)歷采用輔助化療和/或放射療法的進(jìn)一步治療。這些治療由于其對生長和分裂中的任何細(xì)胞的非特異性和細(xì)胞毒性而具有許多副作用。盡管最近在診斷和治療選擇方面有所改善，但54％的患者即使在新輔助治療后仍會復(fù)發(fā)。因此，有更多可替代的和有效的治療來治療crc患者是至關(guān)重要的。

20、目前crc的化療包括主要基于氟嘧啶(5-fu)的單藥療法和含有一種或幾種藥物(包括奧沙利鉑(ox)、伊立替康(iri)和卡培他濱(cap或xeloda或xel))的多藥方案，其中組合療法方案folfox(5-fu+ox)、foxfiri(5-fu+iri)、xelox或capox(cap+ox)和capiri(cap+ox)代表一線治療的主要方法。然而，化療與諸如全身毒性、不令人滿意的反應(yīng)速率以及不可預(yù)測的先天性和獲得性耐藥性以及低腫瘤特異性選擇性的某些限制相關(guān)。

21、患有轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌(mcrc)的患者的5年總存活率<10％。目前，用于治療受影響患者的主要化療劑是基于氟嘧啶(靜脈內(nèi)或口服)的，作為單藥治療，諸如靜脈內(nèi)5-氟尿嘧啶(5-fu)和口服卡培他濱(cap)；或作為多藥方案，包括組合folfox(5-fu和奧沙利鉑)、folfiri(5-fu和伊立替康)、xelox/capox(cap和奧沙利鉑)、capiri(cap和伊立替康)。除傳統(tǒng)化療外，egfr靶向藥(西妥昔單抗和帕尼單抗)已被批準(zhǔn)用于mcrc的一線治療。西妥昔單抗與folfiri或帕尼單抗與folfox的組合具有顯著增強(qiáng)的治療功效。然而，對于早期mcrc的治療決策并不考慮braf或kras突變，因?yàn)槿缭谂R床試驗(yàn)中所見，這些突變會導(dǎo)致預(yù)后極其糟糕。盡管近年來患有mcrc的患者的存活率有所提高，但具有上述突變的患者的反應(yīng)和預(yù)后仍然較差。

22、目前缺乏有效的療法，以及存在非特異性細(xì)胞毒性限制，又鑒于患有braf或kras突變型mcrc的患者對前瞻性療法有著大量尚未滿足的需求，這促使研究人員轉(zhuǎn)向開發(fā)預(yù)測性、預(yù)防性和個性化的醫(yī)學(xué)策略，以改善對crc和mcrc的治療。

23、胃癌是全球惡性疾病死亡的第二大原因，其中在東亞、南亞和中亞；中歐和東歐；和南美洲的死亡率尤其高。胃癌的治療選擇因癌癥分期而異：非常早期的癌癥通?？梢酝ㄟ^手術(shù)治療。潛在可切除的癌癥通?？梢酝ㄟ^手術(shù)(采用胃次全切除術(shù)或胃全切除術(shù))作為第一治療來治療。也可以去除附近的淋巴結(jié)和可能的附近器官的部分。此外，患者可以接受單獨(dú)的化療或化療加放射療法(放化療)，例如患者可以接受5-氟尿嘧啶(5-fu)與順鉑(cddp)的組合(fp療法)。其他可能的治療方案包括表柔比星、順鉑和氟尿嘧啶(ecf療法)，或者可以使用其中氟尿嘧啶被卡培他濱替代的方案(ecx療法)或其中順鉑被奧沙利鉑替代的ecf療法(eof療法)?？商娲兀樸K和氟尿嘧啶兩者可以被奧沙利鉑和卡培他濱替代(eox療法)。

24、在轉(zhuǎn)移性胃癌中，治療旨在控制癌癥的生長，并且可以包括單獨(dú)的化療、化療加免疫療法、或化療連同放射療法。鉑和氟嘧啶(5-fu)的組合是非治愈性情境內(nèi)的全球標(biāo)準(zhǔn)一線化療方案。在鉑和5-fu失敗后，紫杉醇加雷莫蘆單抗已被確立為標(biāo)準(zhǔn)二線療法。然而，圍手術(shù)期flot方案(氟尿嘧啶、奧沙利鉑、多西他賽)期間的治療相關(guān)神經(jīng)病、進(jìn)展或所述圍手術(shù)期flot方案后的快速復(fù)發(fā)增加了對無紫杉烷二線療法的需求。三氟尿苷/替吡嘧啶(tipiracil)最近被批準(zhǔn)用于患有轉(zhuǎn)移性胃癌的患者。除了化療之外，患者還可以用諸如伊匹單抗(抗ctla-4)、納武單抗(抗pd-1)、派姆單抗(抗pd-1)或阿替利珠單抗(抗pd-l1)的免疫檢查點(diǎn)抑制劑治療。

25、在診斷上，胃腸內(nèi)鏡檢查以及分期腹腔鏡檢查(sl)(其為只需要小切口的微創(chuàng)、簡單的程序)對于胃癌的診斷是不可或缺的。sl的優(yōu)點(diǎn)包括提供腹膜播散和漿膜外侵襲的準(zhǔn)確診斷，以及進(jìn)行腹膜灌洗用于細(xì)胞學(xué)檢查的能力。在成像未產(chǎn)生診斷的患有晚期胃癌的患者中，在治療前獲得的腹膜灌洗細(xì)胞學(xué)檢查對于治療計(jì)劃制定可以是非常重要的。通過sl獲得的用于腹膜播散評價的腹膜灌洗細(xì)胞學(xué)檢查被認(rèn)為可用于評估新輔助化療和/或免疫療法的效果。

26、在所有原發(fā)性肝癌中最常見的肝臟腫瘤是肝細(xì)胞癌(hcc)，占病例的75％-85％。hcc通常在晚期被診斷，對此有效的治療選擇仍然有限。直到2007年，對于被診斷患有晚期疾病的患者或在其他治療失敗后轉(zhuǎn)變?yōu)橥砥诩膊〉幕颊?，都沒有有效的治療選擇。在2007年與2016年間，索拉非尼是由美國食品和藥物管理局(fda)批準(zhǔn)的作為晚期hcc的標(biāo)準(zhǔn)治療的第一個全身性藥物。近年來，已經(jīng)開發(fā)了其他小分子藥物，其包括已獲批準(zhǔn)或仍在經(jīng)歷臨床試驗(yàn)的侖伐替尼、瑞拉非尼或卡贊替尼。這些藥物目前也在與免疫檢查點(diǎn)抑制劑(諸如納武單抗或派姆單抗)組合進(jìn)行測試。此外，正在測試免疫檢查點(diǎn)抑制劑和血管生成抑制劑的組合(諸如阿替利珠單抗和貝伐單抗)。

27、食管癌作為gi癌的一種形式根據(jù)其分期進(jìn)行治療，可以包括內(nèi)窺鏡治療以及化療和放射療法。用于治療食管癌但通常不與輻射一起給予的常見藥物和藥物組合包括ecf：表柔比星(ellence)、順鉑和5-fu(尤其是用于胃食管交界處腫瘤)，dcf：多西他賽(泰索帝)、順鉑和5-fu，或三氟尿苷和替吡嘧啶(lonsurf)(呈丸劑形式的組合藥物)。

28、對于胰腺癌，已經(jīng)批準(zhǔn)了幾種化療方案，最廣泛使用和研究最好的藥劑是吉西他濱。吉西他濱通常與白蛋白結(jié)合(nab)的紫杉醇組合施用，這與吉西他濱單一療法相比改善了存活時間?？商娲闹委熯x擇包括多藥方案folfirinox(5-氟尿嘧啶、甲酰四氫葉酸、伊立替康和奧沙利鉑)。此外，對于胰腺癌，正在臨床評估組合療法，所述組合療法使用免疫檢查點(diǎn)抑制劑(諸如派姆單抗或納武單抗)與吉西他濱、納米顆粒白蛋白結(jié)合型紫杉醇或卡培他濱的組合。

29、鳥苷酸環(huán)化酶(guanylyl?cyclase)2c(gucy2c，ec：4.6.1.2)是合成鳥苷3’,5’-環(huán)單磷酸(環(huán)gmp；cgmp)的受體酶蛋白家族的成員。gucy2c是內(nèi)源性激素配體：鳥苷肽和尿鳥苷肽的跨膜受體。與胞外受體結(jié)合的配體催化gtp轉(zhuǎn)化為環(huán)狀gmp(cgmp)，并且啟動下游cgmp相關(guān)信號傳導(dǎo)通路，所述信號傳導(dǎo)通路與腸道穩(wěn)態(tài)過程(諸如上皮細(xì)胞增殖、分化和細(xì)胞凋亡)的調(diào)節(jié)有關(guān)(lisby等人expert?rev?precis?med?drug?dev.2021；6(2):117-129.)。

30、gucy2c由腸上皮細(xì)胞特異性表達(dá)。gucy2c調(diào)節(jié)細(xì)胞沿隱窩-絨毛和隱窩-表面軸的動態(tài)進(jìn)展，從而協(xié)調(diào)穩(wěn)態(tài)過程(包括增殖、dna修復(fù)、代謝程序化、譜系特異性細(xì)胞命運(yùn)和組織該軸的上皮-間充質(zhì)相互作用)。鑒于gucy2c在維持上皮再生中的主要作用，gucy2c-cgmp軸的失調(diào)促進(jìn)了除了結(jié)直腸癌之外還包括炎性腸病和腸運(yùn)輸障礙的病理。重要的是，沉默gucy2c信號傳導(dǎo)軸通過失去配體結(jié)合與結(jié)直腸腫瘤發(fā)生相關(guān)。

31、無論解剖位置或分級如何，在所有原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性人結(jié)直腸腫瘤以及胃食管和胰腺腫瘤的子集中幾乎普遍(>95％)可以檢測到gucy2c蛋白，但在gi道外產(chǎn)生的腫瘤中未檢測到。gucy2c也顯示出在食管腫瘤、胃腫瘤和胰腺腫瘤中表達(dá)(danaee等人(2017)plosone.2017；12(12):e0189953)。

32、鑒于其在crc和mcrc中的獨(dú)特表達(dá)模式，在這些疾病的治療中采取了多種方法以利用gucy2c，所述方法包括：使用gucy2c的癌癥疫苗，將其用作car-t細(xì)胞療法的靶標(biāo)(magee等人cancer?immunol?res.6(5),509-516(2018))，或使用靶向gucy2c的治療性抗體和抗體-藥物綴合物。wo?2013/163633?a1披露了抗gucy2c抗體和包含澳瑞他汀e(mmae)和奧瑞他汀f?mmae(mmaf)(它們通過抑制微管蛋白聚合來抑制有絲分裂)的抗gucy2c?adc。使用mmae作為有效載荷的抗gucy2c?adc?tak264(mln0264、5f9vcmmae)的臨床試驗(yàn)已經(jīng)終止。wo?2021/205325?a1披露了抗cd3-gucy2c雙特異性抗體及其各自在癌癥療法中誘導(dǎo)gucy2c陽性靶細(xì)胞中的溶細(xì)胞性t細(xì)胞應(yīng)答的用途。

33、這些努力表明針對gucy2c的療法可能是有效的，然而，鑒于缺乏批準(zhǔn)的針對gucy2c的療法，仍然相當(dāng)需要具有高效力和良好功效特征的治療方式。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、諸位發(fā)明人出人意料地發(fā)現(xiàn)，根據(jù)本發(fā)明的基于鵝膏毒素的綴合物的特征在于gucy2c陽性癌癥的體外以及體內(nèi)模型的高效力和功效，所述綴合物包含抗gucy2c抗體或其抗原結(jié)合抗體片段與將抗gucy2c抗體或抗體片段與如本文所公開的鵝膏毒素連接的不可切割或可切割接頭的組合。

2、鑒于現(xiàn)有技術(shù)，因此本發(fā)明的一個目的是提供與gucy2c特異性結(jié)合的抗體，以及包含所述抗gucy2c抗體的綴合物，所述綴合物包含至少一種鵝膏毒素和至少一個將所述抗gucy2c抗體與所述至少一種鵝膏毒素連接的接頭，介導(dǎo)靶細(xì)胞中的細(xì)胞毒性作用，如本技術(shù)中所描述的。

3、本發(fā)明的另一個目的是提供包含此類綴合物的藥物組合物。

4、本發(fā)明的另一個目的是提供用于在治療癌癥的方法中使用的化合物。

5、在另一個目的中，本發(fā)明涉及提供一種組合物，所述組合物包含如本文所公開的本發(fā)明的綴合物和至少一種免疫檢查點(diǎn)抑制劑，用于在治療癌癥中使用，特別用于在治療結(jié)直腸癌中使用。