背景技術(shù)：
1、天然抗體(nab)在保護性體液免疫中起著至關(guān)重要的作用，并且通常被視為抵抗病原菌和病毒的第一道防線1,2,3。除了它們的保護能力，nab還具有與其結(jié)合自我決定簇的能力相關(guān)的關(guān)鍵的穩(wěn)態(tài)功能4,5。例如，對凋亡細(xì)胞起反應(yīng)的nab促進胞葬作用和細(xì)胞碎片的清除6,7,8。這些重要功能的破壞可能會導(dǎo)致重大的后果，例如在第一抗體缺乏的患者中過敏或自身免疫性疾病的發(fā)病率增加9。
2、盡管有大量的文獻，nab的定義仍然不是很明確。第一個定義可追溯到一個世紀(jì)前卡爾·蘭德斯坦納(karllandsteiner)的工作，將nab描述為在已知暴露于環(huán)境抗原(如出生時存在的抗原)之前產(chǎn)生的抗體10。后來基于nab對一般自我決定簇的特征性反應(yīng)出現(xiàn)了第二個定義4。雖然不太準(zhǔn)確，但后一個定義已經(jīng)取代了最初的名稱，現(xiàn)在被廣泛使用。然而，這兩種截然不同的定義導(dǎo)致了混淆，并阻礙了在研究之間比較nab的能力。在小鼠中，nab主要由b1?b細(xì)胞分泌11。在人類中，nab的來源尚不清楚。除邊緣區(qū)b細(xì)胞外，外周血初始和記憶b細(xì)胞已被描述為與nab共享典型的反應(yīng)模式12,13,14。
3、nab的主要特征是它們的多反應(yīng)性，即與明顯不相關(guān)的抗原結(jié)構(gòu)諸如dna、胰島素、lps、凋亡細(xì)胞上的決定簇或氧化特異性表位(丙二醛)反應(yīng)的能力15,16,17,18。多反應(yīng)性在功能上是有利的，因為它增加了中和病毒的能力19。由于這個原因，這一重要特征在對病毒感染有應(yīng)答的突變b細(xì)胞中被正向選擇。然而，多反應(yīng)性的分子基礎(chǔ)仍未解決。最普遍的觀點認(rèn)為，nab的抗原結(jié)合位點足夠靈活，允許以低到中等的親和力結(jié)合不同的結(jié)構(gòu)15。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、根據(jù)某些實施方式，提供了用于檢測一個或多個受試者中對一種或多種加合物有反應(yīng)性的天然抗體的存在的方法。該方法包括分析從所述一個或多個受試者提供的生物樣品中存在或不存在對如表1a和1b(見下文)中所列的一種或多種加合物有反應(yīng)性的天然抗體。在某些實施方式中，來自受試者的生物樣品選自血液、組織或流體，優(yōu)選地選自毛發(fā)、皮膚、指/趾甲(nail)、唾液、滑液、尿液、體液和血液。在所選擇的實例中，天然抗體是igg抗體和/或igm抗體，通常來自人類或非人類哺乳動物。分析步驟可以使用本領(lǐng)域已知的許多技術(shù)中的任何一種來進行，包括但不限于免疫測定，優(yōu)選地一種反應(yīng)物與可檢測部分直接或間接偶聯(lián)。在具體的實施方式中，使用elisa、ria、多重免疫測定或免疫熒光測定、蛋白質(zhì)印跡、線性測定、斑點印跡測定進行分析。
2、該方法可以使用具有與如表1a和表1b中所列的至少一種加合物結(jié)合的表面的固體載體來進行。該方法可進一步包括將樣品與固體載體接觸，洗滌固體載體，并對洗滌的固體載體施加與天然抗體結(jié)合并產(chǎn)生可檢測信號的一種或多種試劑。在具體的實例中，一種或多種試劑涉及與受試者所屬物種的天然抗體選擇性地結(jié)合的抗體。在更具體的實施方式中，與受試者所屬物種的天然抗體選擇性地結(jié)合的抗體與熒光或比色標(biāo)志物(例如辣根過氧化物酶)綴合或締合。該方法可以任選地進一步包括將天然抗體的可檢測信號與對照進行比較。
3、在甚至更具體的實施方式中，生物樣品是來自一個或多個新生兒的臍帶血和來自一個或多個6個月至70歲齡受試者的外周血。
4、根據(jù)另一實施方式，提供了包括多種固體載體的試劑盒，其中，該多種固體載體各自單獨用選自表1a和1b中所列的加合物中的加合物包被。該試劑盒可以包括若干組不同的固體載體，每組固體載體包括不同的加合物。
5、其他實施方式涉及能夠測量生物樣品中一種或多種天然抗體與一種或多種具有固體表面的固體載體的相互作用的多重測定方法。該方法包括使固體載體與生物樣品接觸，固體載體的固體表面被處理以包括表1a和1b中所列的各自化學(xué)加合物，以及相對于用對照加合物處理的孔中捕獲的天然抗體水平，測定每個所述孔中捕獲的天然抗體水平。
6、根據(jù)另一實施方式，提供了能夠測量生物樣品中一種或多種天然抗體與一種或多種基底表面的相互作用的多重分析方法，該方法包括獲得通過將表1a和1b中所列的一種或多種加合物附接到多個具有獨特?zé)晒鈽?biāo)記特征的微球上而產(chǎn)生的加合物/微球試劑。所述附接可以是直接的或間接的。將生物樣品與加合物/微球混合以形成混合物，并洗滌該混合物以從微球中去除未結(jié)合的生物樣品?？梢允褂门c一種或多種天然抗體結(jié)合的熒光標(biāo)記試劑來檢測由一種或多種加合物捕獲的來自生物樣品的一種或多種天然抗體。在一個實例中，熒光標(biāo)記劑包括藻紅蛋白。
7、根據(jù)其他實施方式，公開了用于確定受試者是否患有胰腺癌的方法。該方法包括分析來自受試者的生物樣品中(i)抗磷酸化蘇氨酸抗體、(ii)抗磷酸化酪氨酸抗體和(iii)抗磷酸化絲氨酸抗體的存在，并且如果生物樣品包括(i)、(ii)和(iii)，或者相對于健康對照(i)、(ii)或(iii)的水平升高，則將患者診斷為患有胰腺癌或有患胰腺癌的風(fēng)險。該方法可以任選地進一步包括如果診斷為患有胰腺癌，則對受試者施用癌癥療法。
8、在又其他的實施方式中，公開了鑒定受試者中針對移植的移植材料的抗體的特異性的方法。這個方法包括將來自受試者的樣品暴露于如表1a和1b中所列的一種或多種加合物；以及確定樣品中抗體對一種或更多種加合物的反應(yīng)性。在具體的實例中，移植的移植材料包括移植的器官。該方法可進一步包括鑒定與一種或多種抗體反應(yīng)的加合物作為針對移植的移植材料的免疫應(yīng)答的生物標(biāo)志物。在具體的實例中，該生物標(biāo)志物選自甲基化蛋白質(zhì)、磷酸化蛋白質(zhì)或核苷酸衍生物中的一種或多種。在更具體的實例中，該生物標(biāo)志物選自膽紅素、mda-賴氨酸、adp-核糖、三甲基化賴氨酸和磷酸化絲氨酸。該方法可進一步包括如果檢測到反應(yīng)性，則向受試者給藥有效量的免疫抑制劑。
9、根據(jù)另一實施方式，公開了用于測定針對移植的移植材料的免疫應(yīng)答或免疫應(yīng)答水平的方法中的用途的試劑盒。該試劑盒包括固體載體，所述固體載體具有用選自甲基化蛋白質(zhì)、磷酸化蛋白質(zhì)和/或若干種核苷酸衍生物的生物標(biāo)志物處理的表面，其中，任選地，該固體載體包括多孔板、珠粒或微球，并且其中該試劑盒任選地進一步包括檢測試劑。在更具體的實施方式中，生物標(biāo)志物選自膽紅素、mda-賴氨酸、adp-核糖、三甲基化賴氨酸或磷酸化絲氨酸或其組合。
1.一種用于檢測一個或多個受試者中對一種或多種加合物有反應(yīng)性的天然抗體的存在的方法，包括，
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，來自所述受試者的所述生物樣品選自血液、組織或流體，優(yōu)選選自毛發(fā)、皮膚、指/趾甲、唾液、滑液、尿液、體液和血液，或者其中所述生物樣品是臍帶血或外周血。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中，所述分析使用免疫測定進行，優(yōu)選將一種反應(yīng)物與可檢測部分直接或間接偶聯(lián)，其中，任選地，其中所述可檢測部分是與所述受試者所屬物種的天然抗體結(jié)合的抗體，所述抗體與熒光標(biāo)志物綴合或締合。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中，使用elisa、ria、多重免疫測定或免疫熒光測定、蛋白質(zhì)印跡、線性測定、斑點印跡測定進行分析。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中，分析包括對所述生物樣品使用固體載體，所述固體載體包括結(jié)合到其表面的根據(jù)表1a和表1b中所列的至少一種加合物。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，進一步包括洗滌孔，并對洗滌的孔施加與天然抗體結(jié)合并產(chǎn)生可檢測信號的一種或多種試劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中，所述一種或多種試劑包括與所述受試者所屬物種的天然抗體選擇性地結(jié)合的抗體，其中與所述受試者所屬物種的天然抗體選擇性地結(jié)合的所述抗體任選地與熒光或比色標(biāo)志物綴合或締合。
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的方法，進一步包括將所述天然抗體的所述可檢測信號與對照進行比較。
9.一種多重測定方法，能夠測量生物樣品中一種或多種天然抗體與一種或多種固體載體的相互作用，每種固體載體包括固體表面，所述多重測定方法包括：將所述固體載體與所述生物樣品接觸，所述固體表面包括一種或多種選自表1a和表1b的各自化學(xué)加合物，并測定由所述固體表面上的所述加合物捕獲的天然抗體的水平。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的多重測定方法，其中，所述固體載體包括珠?；蛭⑶?，并且所述方法進一步包括
11.一種包括多重試劑的試劑盒，所述多重試劑包括直接或間接與表1b中所列的一種或多種加合物附接的多個微球，其中，與各自加合物附接的所述多個微球包括獨特的熒光標(biāo)記特征。
12.一種用于確定受試者是否患有胰腺癌的方法，所述方法包括分析來自所述受試者的生物樣品中(i)抗磷酸化蘇氨酸抗體、(ii)抗磷酸化酪氨酸抗體和(iii)抗磷酸化絲氨酸抗體的存在，并且如果所述生物樣品包括(i)、(ii)和(iii)，或者相對于健康對照(i)、(ii)或(iii)的水平升高，則將患者診斷為患有胰腺癌或有患胰腺癌的風(fēng)險，以及任選地，如果診斷為患有胰腺癌，則對所述受試者施用癌癥療法。
13.一種鑒定受試者中針對移植的移植材料的抗體的特異性的方法，所述方法包括：
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中，所述移植的移植材料包括移植的器官。
15.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，進一步包括鑒定與所述一種或多種抗體反應(yīng)的加合物作為針對所述移植的移植材料的免疫應(yīng)答的生物標(biāo)志物。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中，所述生物標(biāo)志物包括甲基化蛋白質(zhì)、磷酸化蛋白質(zhì)或核苷酸衍生物中的一種或多種。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中，所述生物標(biāo)志物選自膽紅素、mda-賴氨酸、adp-核糖、三甲基化賴氨酸和磷酸化絲氨酸。
18.根據(jù)權(quán)利要求13-17中任一項所述的方法，進一步包括如果檢測到反應(yīng)性，則向所述受試者給藥有效量的免疫抑制劑。
19.一種試劑盒，用于測定針對移植的移植材料的免疫應(yīng)答或免疫應(yīng)答水平的方法中的用途，所述試劑盒包括固體載體，所述固體載體具有用選自甲基化蛋白質(zhì)、磷酸化蛋白質(zhì)和/或若干種核苷酸衍生物的生物標(biāo)志物處理的表面，其中，任選地，所述固體載體包括多孔板、珠粒或微球，并且其中所述試劑盒任選地進一步包括檢測試劑。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的試劑盒，其中，所述生物標(biāo)志物選自膽紅素、mda-賴氨酸、adp-核糖、三甲基化賴氨酸或磷酸化絲氨酸或其組合。