本發(fā)明涉及分子育種，尤其涉及一種rcwrky29基因及其在增強月季(rosa?hybrida)對灰霉病抗性中的應用。
背景技術：
1、月季（rosa?hybrida）是薔薇科（rosaceae）薔薇屬（rosa）多年生常綠或者半常綠木本觀賞植物。月季兼具花型端莊、花色艷麗、花香馥郁等特點，有很高的觀賞、經(jīng)濟和文化價值，位居世界四大切花之首，廣泛應用于園林綠化、庭院裝飾、盆花、香料和化妝品工業(yè)等方面。
2、切花月季是四大切花之一，灰霉病是月季鮮切花采后運輸過程中面臨的危害最大的真菌性病害，嚴重損害了切花月季的觀賞價值和經(jīng)濟效益，月季切花在長途物流運輸?shù)倪^程中極易受到灰霉病的侵害，約?15-40%的月季由于采后腐敗而完全喪失經(jīng)濟價值?；瘜W防治、物理防治、生物防治和農業(yè)防治都存在一定的弊端。因此，從根本上防治月季灰霉病應該從月季抗灰霉病遺傳育種入手。通過研究月季和灰霉病的相互作用，挖掘和培育高抗月季新品種，減少月季切花產(chǎn)業(yè)因為灰霉病產(chǎn)生經(jīng)濟損失。目前，針對rcwrky29基因在月季抗灰霉病中的具體作用機制尚不明確，因此有必要通過基因編輯或轉基因技術來研究其功能。
技術實現(xiàn)思路
1、為了解決現(xiàn)有技術的問題，本發(fā)明的目的是提供一種rcwrky29基因及其在增強月季(rosa?hybrida)對灰霉病抗性中的應用。通過該基因的過表達來增強月季對灰霉病的抗性，培育高抗月季新品種。
2、為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術方案：
3、本申請第一方面提供一種rcwrky29基因或其轉錄翻譯蛋白表達的產(chǎn)品在增強月季抵抗灰霉病的應用，rcwrky29基因的核苷酸序列如seq?id?no.1所示。
4、本申請第二方面提供一種增強月季抵抗灰霉病的方法，其特征在于包括如下步驟：（1）構建包含權利要求1所述 rcwrky29基因的重組載體；
5、（2）?將所述重組載體導入月季細胞中，實現(xiàn) rcwrky29基因的過表達。
6、進一步地，在步驟（1）中，載體引物設計與載體構建：以ecori和kpni為酶切位點，將 rcwrky29的沉默片段序列插入trv2空載中，利用同源重組的方法設計引物，構建trv- ? rcwrky29載體，所述 rcwrky29基因的沉默片段的核苷酸序列如seq?id?no:?3所示。
7、進一步地，在步驟（2）中，選取smai和kpni為酶切位點，將 rcwrky29基因序列插入psuper-1300載體中，利用同源重組的方法設計引物，以構建 rcwrky29-gfp載體，重組載體通過農桿菌介導轉化法導入月季細胞。
8、有益效果：本發(fā)明從月季品種‘月月粉’基因組中鑒定出一個抗病調節(jié)基因rcwrky29，發(fā)現(xiàn)該基因在月季花瓣組織中高表達，在根和葉等組織中表達量低。在灰霉病菌侵染月季花朵不同時間中rcwrky29的表達情況分析中，發(fā)現(xiàn)rcwrky29的表達在灰霉侵染后一定時間段里有明顯升高。因此本申請推測rcwrky29可能參與調節(jié)月季對灰霉病的抵抗作用。
9、與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點：
10、（1）本發(fā)明中根據(jù)rcwrky29在月季花瓣中的表達結果，瞬時沉默和過表達花瓣中的rcwrky29，發(fā)現(xiàn)rcwrky29的異常表達會影響月季花瓣對灰霉病的抗性，過表達rcwrky29能促進花瓣對灰霉病的抵抗，反之，沉默則會抑制花瓣對灰霉病的抵抗。
11、（2）本發(fā)明在月季生長狀態(tài)良好、無灰霉病菌侵染的花瓣中沉默以及過表達rcwrky29基因，研究結果發(fā)現(xiàn)沉默rcwrky29處理的花瓣病斑面積更大，對灰霉病的抗性降低；過表達rcwrky29處理的花瓣對灰霉病的抗性增強，總之，rcwrky29對調節(jié)月季抗灰霉病具有重要意義。
1.一種rcwrky29基因或其轉錄翻譯蛋白表達的產(chǎn)品在增強月季抵抗灰霉病的應用，其特征在于：rcwrky29基因的核苷酸序列如seq?id?no.1所示。
2.一種增強月季抵抗灰霉病的方法，其特征在于包括如下步驟：（1）構建包含權利要求1所述rcwrky29基因的重組載體；
3.根據(jù)權利要求2所述的方法，其特征在于：在步驟（1）中，載體引物設計與載體構建：以ecori和kpni為酶切位點，將rcwrky29的沉默片段序列插入trv2空載中，利用同源重組的方法設計引物，構建trv-?rcwrky29載體，所述rcwrky29基因的沉默片段的核苷酸序列如seq?id?no:?3所示。
4.根據(jù)權利要求2所述的方法，其特征在于：在步驟（2）中，選取smai和kpni為酶切位點，將rcwrky29基因序列插入psuper-1300載體中，利用同源重組的方法設計引物，以構建rcwrky29-gfp載體，重組載體通過農桿菌介導轉化法導入月季細胞。