本發(fā)明屬于腫瘤分子生物學，具體涉及抑制或檢測外泌體mir-3150a-5p表達試劑的應用以及鼻咽癌轉移治療藥物和預后制劑。

背景技術：

1、鼻咽癌（nasopharyngeal?carcinoma，npc）發(fā)生于鼻咽粘膜上皮，是頭頸部最為常見的惡性腫瘤。npc?的發(fā)病因素涉及遺傳、環(huán)境和生活方式等多方面，包括eb?病毒感染、吸煙、飲酒、遺傳因素、飲食習慣以及某些化學物質(zhì)和放射線等。

2、世界衛(wèi)生組織將npc?定義為三種類型：角化性、非角化性鱗狀細胞癌和未分化或低分化癌。其中，非角化亞型鼻咽癌占流行地區(qū)腫瘤的95%以上。由于病變早期癥狀不明顯，且npc?具有高度侵襲性和高轉移潛能，70%以上的患者初診即發(fā)現(xiàn)淋巴結轉移，約20-30%的患者發(fā)生遠處轉移，主要包括肺、肝、骨等。盡管放療聯(lián)合化療能有效地控制局部病灶、降低死亡率以及提高5?年總生存率，但發(fā)生遠處轉移患者的治療效果仍然不理想，遠處轉移仍是目前臨床治療失敗的主要原因。

3、外泌體是幾乎所有哺乳動物細胞都會分泌的杯狀雙層膜小囊泡，在血液等體液內(nèi)傳播，可以通過直接與細胞外基質(zhì)相互作用，直接被釋放到生物體液中，將內(nèi)容物傳遞至受體細胞中影響其生物功能。腫瘤外泌體攜帶來源于腫瘤細胞的生物學信息（蛋白、dna和microrna等），其內(nèi)容物的濃度與腫瘤細胞的侵襲能力及腫瘤微環(huán)境相關，通過分析外泌體的表面標記或內(nèi)部成分可以直接獲得細胞的基本信息。由于外泌體有脂質(zhì)膜保護，其內(nèi)容物不易被降解破壞,使得無論新鮮的還是長期保存的樣本皆可用于分析。mirna存在于外泌體內(nèi)容物中，可以通過外泌體的包裹從腫瘤細胞釋放到體液中，不會受到核糖體酶的降解。更重要的是，外泌體可以從眾多體液中獲得(血液、尿液等)，這使得外泌體檢測在腫瘤診療中極具前途，成為一種較為理想的“液體活檢”方法。

4、因此，迫切需要開發(fā)新的可靠的非侵入性早期轉移診斷預后標記物，促進鼻咽癌的早期精準干預和治療，延長鼻咽癌患者的生存期。專利申請cn118086492a公開了mir-376a-5p在鼻咽癌患者血液中的表達水平顯著高于健康人群，可作為鼻咽癌診斷的mi?rna標志物以及治療靶標。本發(fā)明不僅僅是開發(fā)了一種新的鼻咽癌診斷預后標記物mir-3150a-5p，且來源為外泌體，不同于該專利申請的血液來源的標記物。

技術實現(xiàn)思路

1、針對現(xiàn)有技術所存在的問題，本發(fā)明提供了抑制或檢測外泌體mir-3150a-5p表達試劑的應用以及鼻咽癌轉移治療藥物和預后制劑。本發(fā)明是通過外泌體mir-3150a-5p作為預測鼻咽癌轉移風險的標志物，通過分析其表達量即可快速實現(xiàn)鼻咽癌的輔助預后檢測。且mir-3150a-5p可作為治療靶點，靶向抑制其表達可實現(xiàn)鼻咽癌患者的治療，具有較廣的應用前景。

2、本發(fā)明所述mir-3150a-5p的核苷酸序列為caaccucgacgaucuccucagc。

3、本發(fā)明的目的之一是提供抑制外泌體mir-3150a-5p表達試劑的應用，用于制備鼻咽癌治療藥物。

4、進一步地，

5、所述的抑制外泌體mir-3150a-5p表達試劑包括mir-3150a-5p?inhibitior。

6、更進一步地，

7、mir-3150a-5p?inhibitior序列為gcugaggagaucgucgagguug。

8、本發(fā)明的目的之二是提供一種鼻咽癌轉移治療藥物，包括抑制外泌體mir-3150a-5p表達的試劑。

9、進一步地，

10、所述的抑制外泌體mir-3150a-5p表達試劑包括mir-3150a-5p?inhibitior。

11、更進一步地，

12、mir-3150a-5p?inhibitior序列為gcugaggagaucgucgagguug。

13、本發(fā)明的目的之三是提供檢測外泌體mir-3150a-5p表達試劑的應用，用于制備鼻咽癌轉移預后制劑。通過檢測外泌體mir-3150a-5p在鼻咽癌患者中的表達水平以輔助診斷和/或評估鼻咽癌早期轉移風險。

14、進一步地，

15、所述的檢測外泌體mir-3150a-5p表達的試劑，包括pcr檢測試劑。

16、更進一步地，

17、所述的pcr檢測試劑中的擴增引物序列：上游引物為ccaacctcgacgatctcctcagc，下游引物為cagtctcagggtccgaggtattc。

18、優(yōu)選地，所述檢測樣本為血清外泌體。

19、本發(fā)明的目的之四是提供一種鼻咽癌轉移預后制劑，包括檢測外泌體mir-3150a-5p表達試劑。

20、所述的檢測外泌體mir-3150a-5p表達試劑包括pcr檢測試劑。

21、更進一步地，

22、所述的pcr檢測試劑中的擴增引物序列：上游引物為ccaacctcgacgatctcctcagc，下游引物為cagtctcagggtccgaggtattc。

23、優(yōu)選地，所述檢測樣本為血清外泌體。

24、本發(fā)明通過臨床血清外泌體mirna測序和tcga數(shù)據(jù)庫分析，發(fā)現(xiàn)mir-3150a-5p在鼻咽癌轉移患者中的表達顯著高于未轉移患者，其可以作為預測鼻咽癌轉移風險和不良預后的可靠標志物。

25、本發(fā)明通過特異性擴增mir-3150a-5p的試劑盒和血清樣本檢測，實現(xiàn)鼻咽癌早期轉移的快速輔助診斷，且經(jīng)計算分析auc曲線下面積達0.84，靈敏度78%，特異度83%。

26、本發(fā)明設計了基于mir-3150a-5p的抑制劑序列（gcugaggagaucgucgagguug），發(fā)現(xiàn)靶向敲低該mirna能夠顯著抑制鼻咽癌細胞增殖、遷移和侵襲能力，表明其具有開發(fā)為治療鼻咽癌藥物的潛力。

27、檢測血清外泌體中mir-3150a-5p表達水平，用于鼻咽癌轉移的輔助診斷和風險預測?；谠搈irna的引物設計、試劑盒開發(fā)及其在臨床診斷中的具體應用。通過mir-3150a-5p的特異性抑制劑序列，抑制其表達以治療鼻咽癌。包含使用mirna?inhibitor或其他載體（如核酸藥物、生物活性片段）的藥物開發(fā)和治療應用。

28、本發(fā)明可能的變更設計方向或者變形方案：

29、(一)多mirna聯(lián)合檢測

30、可能會以mir-3150a-5p與其他mirna的組合（如多標志物聯(lián)合檢測）取代單一mirna的診斷功能，以提升靈敏度和特異度。

31、(二)樣本來源改進

32、本發(fā)明基于血清外泌體樣本檢測，可能的變形包括利用其他生物樣本如唾液、尿液、組織活檢、血漿作為檢測來源，以實現(xiàn)非侵入式或多樣化的診斷方案。

33、(三)替代抑制劑設計

34、本發(fā)明利用mir-3150a-5p?inhibitor序列抑制該mirna，還可能設計小分子化合物、反義寡核苷酸（aso）、sirna等其他形式的mirna抑制劑。

35、本發(fā)明有益效果

36、本發(fā)明的優(yōu)點如下：本發(fā)明發(fā)現(xiàn)mir-3150a-5p在鼻咽癌轉移患者血清外泌體中的表達水平顯著高于未轉移患者，且經(jīng)計算分析auc曲線下面積為0.84，mir-3150a-5p的診斷靈敏度可達到78％，特異度可達83％。證實mir-3150a-5p基因在鼻咽癌患者診斷預后中具備良好的應用前景。另外，發(fā)現(xiàn)敲低mir-3150a-5p會顯著抑制鼻咽癌細胞及其分泌的外泌體中mir-3150a-5p的表達量且能有效抑制鼻咽癌細胞轉移等惡性進展。上述發(fā)現(xiàn)表明mir-3150a-5p對鼻咽癌的重要性，并提示采用mirna?inhibitor靶向敲低mir-3150a-5p進行鼻咽癌治療的可行性。